活化素Aelisa試劑盒在使用方面有以下事項

　　活化素Aelisa試劑盒檢測目的：用于測定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。

　　試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被人心型脂肪酸結(jié)合蛋白（h-FABP）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人心型脂肪酸結(jié)合蛋白（h-FABP）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

　　活化素Aelisa試劑盒其使用事項主要包括以下幾個方面：

　　1、試劑準(zhǔn)備與處理：

　　試劑盒從冷藏環(huán)境中取出后，應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

　　濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，但洗滌時不影響結(jié)果。

　　2、樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的處理：

　　根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50μl于反應(yīng)孔內(nèi)。

　　若樣本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔最高孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)后再測定，計算時最后乘以總稀釋倍數(shù)。

　　3、加樣操作：

　　各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

　　封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　4、孵育與洗滌：

　　在加入生物素標(biāo)記的抗體、親和鏈酶素-HRP等試劑后，需蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，并在規(guī)定的溫度下溫育相應(yīng)的時間。

　　甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩一定時間后甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)洗滌操作多次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)可適當(dāng)增加。

　　5、底物與終止反應(yīng)：

　　每孔加入底物A、B各50μl，輕輕振蕩混勻，在37℃溫育10分鐘，期間避免光照。

　　取出酶標(biāo)板，迅速加入終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

　　6、結(jié)果判定與記錄：

　　在450nm波長處測定各孔的OD值，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

　　所有樣品、洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

　　7、試劑管理與保存：

　　本試劑不同批號組分不得混用。如需代測或者樣本暫時不測定，可立即低溫凍存，溫度越低越好，中間避免反復(fù)凍融，-20℃以下可保存三個月,-70℃以下可保存六個月。