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PCR熒光定量檢測試劑盒使用方法

日期:2024-05-30瀏覽:930次

PCR熒光定量檢測試劑盒使用方法:

一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)

1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對照。

2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

注意事項:

1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為長期冷凍組織,應盡量避免反復凍融,否則會導致模板的降解,影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。

3. 電泳檢測時,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時會在泳道中出現一大團拖尾亮帶,影響實驗結果。

4. 建議擴增片段長度1 kb以內,以便擴增效率佳。

5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。


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