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EHA101 電擊感受態(tài)細(xì)胞操作規(guī)程

日期:2022-06-15瀏覽:1167次

EHA101 電擊感受態(tài)細(xì)胞操作規(guī)程:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。

二.細(xì)胞處理:

1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

小鼠血小板生成素(mouse TPO)

小鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(mouse TRAIL/APO 2L)

小鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體1(mouse TRAIL R1)

小鼠凝血酶敏感蛋白-1(mouse TSP-1)

小鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白(mouse TM)

小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物(mouse uPA)

小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體(mouse uPA-R)

小鼠血管細(xì)胞粘附分子-1(mouse sVCAM-1)

小鼠血管內(nèi)皮生長因子(mouse VEGF)

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子B(mouse VEGF-B)

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子C(mouse VEGF-C)

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子D(mouse VEGF-D)

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體1(mouse VEGF-R1)

小鼠血管活性腸肽(mouse VIP)

小鼠血管性血友病因子(mouse VWF)

小鼠血管內(nèi)皮生長因子受體-2(mouse VEGF R2)

小鼠軟骨糖蛋白39(mouse YKL-40)


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